微生物限度檢查儀操作流程

實(shí)驗前：

　　1.對實(shí)驗器皿的準備：對玻璃器皿進(jìn)行清洗，將洗凈干燥的平皿、乳缽、刻度吸管等用牛皮紙包裹，放入鼓風(fēng)干燥箱中于160℃干熱滅菌2小時(shí)或放入高壓蒸汽滅菌柜于121℃濕熱滅菌30分鐘，備用。

　　2.對實(shí)驗用培養基及稀釋液的準備：按規定比例配制實(shí)驗所需的各種培養基及稀釋液，包好，放入高壓蒸汽滅菌柜于121℃濕熱滅菌30分鐘，備用。

　　3.潔凈服的準備：將當天實(shí)驗所用潔凈服放入高壓蒸汽滅菌柜于121℃濕熱滅菌30分鐘，備用。
實(shí)驗中：

　　1.將實(shí)驗所需器皿、培養基、潔凈服、樣品、稀釋液放入相應的傳遞窗中，打開(kāi)紫外燈，照射30分鐘。

　　2.打開(kāi)潔凈室的通風(fēng)設備1小時(shí)以上，觀(guān)察潔凈室各個(gè)規定區域的壓差是否符合相應規定范圍，若不符合，則應通知設備部門(mén)及時(shí)進(jìn)行調整。

　　3.進(jìn)入潔凈室，換上工作鞋，用洗手液洗手，烘干，換上潔凈服，戴上口罩、手套，并與噴手器下用75%乙醇或0.1%新潔爾滅對雙手進(jìn)行消毒。

　　4.進(jìn)入萬(wàn)級潔凈走廊，觀(guān)察各個(gè)規定房間的溫度、濕度、壓差是否符合規定，并與傳遞窗中將經(jīng)紫外燈照射后的樣品、器皿稀釋液及培養基，放入相應的實(shí)驗室(如微生物限度檢查室或無(wú)菌檢查室)。并將培養基的溫度控制在45℃以下(若培養基出現凝固現象時(shí)，因微波爐加熱融化;若溫度太高時(shí)，則應用純化水降溫至不燙手背宜。
5.打開(kāi)超凈工作臺的紫外燈，照射30分鐘，然后再打開(kāi)超凈工作臺的通風(fēng)設備。用75%乙醇或0.1%新潔爾滅對實(shí)驗所用工作臺面進(jìn)行擦拭消毒(消毒時(shí)應遵循由里到外，由上到下，由潔凈要求高到潔凈要求低的原則)。

　　6.按照適宜的次序于超凈工作臺內擺放好稀釋液、天平、消毒液、集菌儀、剪刀、鑷子等物品，用75%酒精棉球進(jìn)行消毒，將樣品內包裝表面用碘酒棉球以及75%酒精棉球依次進(jìn)行消毒。將營(yíng)養瓊脂平板與超凈工作臺的左、中、右各置一個(gè)(平板需經(jīng)下預培養48小時(shí)且無(wú)菌生長(cháng))，開(kāi)蓋暴露30min，測定的沉降菌每平板不得超過(guò)1cfu，則符合百級超凈工作臺的沉降菌標準(注：在潔凈工作臺進(jìn)行操作時(shí)，為防止污染，應用酒精棉球對雙手反復消毒)。

　　7.樣品處理(以采用離心薄膜過(guò)濾法為例)：　用天平稱(chēng)取規定量的樣品，置于乳缽中，碾碎，少量幾次加入規定量(用滅好菌的兩頭高量取)的稀釋液，研磨均勻，以制備供試液。8.細菌的檢查：用滅菌吸管吸取規定量的供試液于離心管中，500轉/秒，離心3分鐘。離心后用注射器吸取規定量的上清液于集菌儀中(集菌儀中的濾膜應事先用少量的蛋白胨溶液進(jìn)行潤洗)，再用規定量的蛋白胨溶液進(jìn)行反復沖洗(每次沖洗量不得超過(guò)100ml，每張濾膜的總的沖洗量不得超過(guò)1000ml，且沖洗過(guò)程中應該保持濾膜的完整性)。并用等量的蛋白胨溶液制備陰性對照的濾膜。