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全自動固相萃取儀的使用步驟

發(fā)布時間: 2023-12-20  點擊次數(shù): 373次

全自動固相萃取儀的使用步驟
1.選擇小柱或濾膜
  小柱或濾膜的大小與規(guī)格應(yīng)視樣品中待測物的濃度大小而定。對于濃度較低的體內(nèi)樣品, 一般應(yīng)選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。
  2.活化
  萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml 溶劑沖洗濾膜使填料保持濕潤, 因為填料干燥會降低樣品保留值,而各小柱的干燥程度不一,也會影響回收率的重現(xiàn)性。
  3.上樣
  一般可采取以下四種方法:
  (1) 用0.1mol/L 酸或堿調(diào)節(jié), 使pH<3或pH>9, 離心取上層液萃??;
  (2)用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 以水或緩沖液稀釋后萃??;
  (3)用酸或無機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 調(diào)節(jié)pH 值后萃取;
  (4)超聲15min后加入水、緩沖液, 取上清液萃取。流速應(yīng)控制為1ml/min, 流速快不利于待測物與固定相結(jié)合。
  4.淋洗
  反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液, 可在清洗液中加入少量有機(jī)溶劑、無機(jī)鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過一個小柱的容積, 而SPE濾膜為5~10ml。
  5.洗脫
應(yīng)選用5~10ml離子強(qiáng)度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度, 則可先將洗脫液揮干后, 再用流動相重組殘留物后進(jìn)樣。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水, 可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強(qiáng)的HPLC 分析柱分析洗脫物。

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