1、目的與要求
1.1 學(xué)習(xí)索氏抽提法測定脂肪的原理與方法。
1.2 掌握索氏抽提法基本操作要點(diǎn)及影響因素。
2、原理
利用脂肪能溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì),在索氏提取器中將樣品用無水乙mi或石油mi等溶劑反復(fù)萃取,提取樣品中的脂肪后,蒸去溶劑,所得的物質(zhì)即為脂肪或稱粗脂肪。
3、儀器與試劑
3.1 索氏提取器 如圖3-3所示。
3.2 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱。
3.3 干燥器。
3.4 恒溫水浴箱。
3.5 濾紙筒。
3.6 無水乙mi(不含過氧化物)或石油mi(沸程30℃~60℃)
4、測定步驟
4.1 樣品處理
4.1.1 固體樣品: 準(zhǔn)確稱取均勻樣品2g~5g(J確至0.01mg),裝入濾紙筒內(nèi)。
4.1.2 液體或半固體: 準(zhǔn)確稱取均勻樣品5g~10g(J確至0.01mg),置于蒸發(fā)皿中,加入海砂約20g,攪勻后于沸水浴上蒸干,然后在95℃~105℃下干燥。研細(xì)后全部轉(zhuǎn)入濾紙筒內(nèi),用沾有乙mi的脫脂棉擦凈所用器皿,并將棉花也放入濾紙筒內(nèi)。
4.2 索氏提取器的清洗
將索氏提取器各部位充分洗滌并用蒸餾水清洗后烘干。脂肪燒瓶在103℃±2℃的烘箱內(nèi)干燥至恒重(前后兩次稱量差不超過2mg)。
4.3 樣品測定
4.3.1 將濾紙筒放入索氏提取器的抽提筒內(nèi),連接已干燥至恒重的脂肪燒瓶,由抽提器冷凝管上端加入乙mi或石油醚至瓶內(nèi)容積的2/3處,通入冷凝水,將底瓶浸沒在水浴中加熱,用一小團(tuán)脫脂棉輕輕塞入冷凝管上口。
4.3.2 抽提溫度的控制:水浴溫度應(yīng)控制在使提取液在每6min~8min回流一次為宜。
4.3.3 抽提時(shí)間的控制: 抽提時(shí)間視試樣中粗脂肪含量而定,一般樣品提取6h~12h,堅(jiān)果樣品提取約16h。提取結(jié)束時(shí),用毛玻璃板接取一滴提取液,如無油斑則表明提取完畢。
4.3.4 提取完畢。取下脂肪燒瓶,回收乙mi或石油mi。待燒瓶內(nèi)乙mi僅剩下1~2mL時(shí),在水浴上趕盡殘留的溶劑,于95℃~105℃下干燥2h后,置于干燥器中冷卻至室溫,稱量。繼續(xù)干燥30min后冷卻稱量,反復(fù)干燥至恒重(前后兩次稱量差不超過±2mg)。
5、結(jié)果計(jì)算
5.1 數(shù)據(jù)記錄表
樣品的質(zhì)量m/g 脂肪燒瓶的質(zhì)量m0/g 脂肪和脂肪燒瓶的質(zhì)量(m1)(單位:g)
次 D二次 D三次 恒重值
5.2 計(jì)算公式
X(%)= ×100
式中:X—樣品中粗脂肪的質(zhì)量百分?jǐn)?shù),單位(%)。
m—-樣品的質(zhì)量, 單位(g);
m0 —脂肪燒瓶的質(zhì)量, 單位(g);
m1 —脂肪和脂肪燒瓶的質(zhì)量, 單位(g)。
6、注意事項(xiàng)
6.1 抽提劑乙mi是易燃,易爆物質(zhì),應(yīng)注意通風(fēng)并且不能有火源。
6.2 樣品濾紙筒的高度不能超過虹吸管,否則上部脂肪不能提盡而造成誤差。
6.3 樣品和醚浸出物在烘箱中干燥時(shí),時(shí)間不能過長,以防止不飽和的脂肪酸受熱氧化而增加質(zhì)量。
6.4 乙mi若放置時(shí)間過長,會產(chǎn)生過氧化物。過氧化物不穩(wěn)定,當(dāng)蒸餾或干燥時(shí)會發(fā)生爆炸,故使用前應(yīng)嚴(yán)格檢查,并除去過氧化物。
6.4.1 檢查方法:取5mL乙mi于試管中,加KI(100g/L)溶液1mL,充分振搖1min。靜置分層。若有過氧化物則放出游離碘,水層是黃色(或加4滴5 g/L淀粉指示劑顯藍(lán)色),則該乙mi需處理后使用。
6.4.2 去除過氧化物的方法:將乙mi倒入蒸餾瓶中加一段無銹鐵絲或鋁絲,收集重蒸餾乙mi。
6.5 反復(fù)加熱可能會因脂類氧化而增重,質(zhì)量增加時(shí),以增重前的質(zhì)量為恒重。
7、思考題
7.1 簡述索氏抽提器的提取原理及應(yīng)用范圍?
7.2 潮濕的樣品可否采用乙mi直接提???為什么?
7.3 使用乙mi作脂肪提取溶劑時(shí),應(yīng)注意的事項(xiàng)有哪些?為什么?