脂肪測定儀之索氏提取法實驗過程介紹

索氏提取法對包含在組織內(nèi)部的脂肪等不能*提取出來，酸分解法常使磷脂分接而損失。而在一定的水分存在下，極性的甲醇及非極性的*混合溶液卻能有效地提取結合態(tài)脂類，如脂蛋白、蛋白脂等及磷脂，此法對于高水分生物試樣如鮮魚、蛋類等脂類的測定更為有效。

 (1)原理

    *-甲醇提取法的原理是將試樣分散于*-甲醇混合液中，于水浴上輕微沸騰，-甲醇混合液與一定的水分形成提取脂類的有效溶劑，在使試樣組織中結合態(tài)脂類游離出來的同時與磷脂等極性脂類的親合性增大，從而有效地提取出全部脂類。再經(jīng)過濾，除去非脂成分，然后回收溶劑，對于殘留脂類要用石油醚提取，定量。

• 儀器

①具塞三角瓶

    ②電熱恒溫水?。?0~100℃

    ③提取裝置

   ④布氏漏斗

   ⑤具塞離心管

   ⑥離心機：3000r/min

（3）試劑

    ①*：97%（體積分數(shù)）以上。

    ②甲醇：96%（體積分數(shù)）以上。

     ③ *甲醇混合液：按2：1體積比混合。

    ④ 石油醚。

    ⑤ 無水硫酸鈉：以120~135℃干燥1~2h。  

（4）操作步驟

　  ①提取  

    準確稱取均勻樣品5g于具塞三角瓶內(nèi)（高水分食品可加適量硅藻土使其分散），加入60mL*-甲醇混合液（對于干燥食品，可加入2~3mL水）。連接提取裝置，于650C水浴中，由輕微沸騰開始，加熱1h進行提取。

　  ②回收溶劑

    提取結束后，取下燒瓶用布氏漏斗過濾，并用*-甲醇混合液洗滌濾器，燒瓶及濾器中試樣殘渣，濾液、洗滌液一并收集于具塞三角瓶內(nèi)，置65~700C水浴中回收溶劑，至燒瓶內(nèi)物料呈濃稠態(tài)，而不能使其干，然后冷卻。

  ③石油醚萃取、定量

用移液管加入25ml石油醚，然后加入15g無水硫酸鈉，立即加塞混搖1 min ，將醚層移入具塞離心沉淀管進行離心分離（3000r/min）5min.用10mL移液管加入迅速吸取離心管中澄清的石油醚10mL,于已稱量至恒量的干燥稱量瓶內(nèi)，蒸發(fā)去除石油醚，于100~105℃烘箱中烘至恒量（約30 min ）。

（5）結果計算