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實(shí)驗室組織細胞破碎總結分析

發(fā)布時(shí)間: 2019-10-10  點(diǎn)擊次數: 1684次

實(shí)驗室組織細胞破碎總結分析如下:

1. 機械法 
  主要通過(guò)機械切力的作用使組織細胞破碎的方法,常用的器械有組織搗碎機、勻漿器、研缽和研磨、壓榨器等。
  1)組織搗碎機 一般用于動(dòng)物組織、植物肉質(zhì)種子、柔嫩的葉芽等,轉速可高達10000rpm/M以上。由于旋轉刀片的機械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
  2)勻漿器 勻漿器的研缽磨球和玻璃管內壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離,破碎細胞的程度比組織搗碎機高。制作勻漿器的材料,除玻璃外,還可以用硬質(zhì)塑料、不銹鋼、人造熒光樹(shù)脂等。
  3)研缽 多用于細菌或其他堅硬植物材料,研磨時(shí)常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨劑,以提高研磨效果。
  4)細菌磨 是一種改良了的研磨器,比研缽具有更大的研磨面積,而且低部有出口。操作時(shí)先把細菌和研磨粉調成糊狀,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可將細菌細胞*磨碎。
  2. 物理法 
  主要通過(guò)各種物理因素使組織細胞破碎的方法。在生化制備中常用的方法有:
  1)反復凍溶法 先將樣品深冷至-15---20度使之凍固,再緩慢的融化,反復多次,多用于動(dòng)物性材料。
  2)急熱驟冷法 將材料投入沸水中,維持85-90分鐘,至水浴中急速冷卻,此法可用于細菌及病毒材料。
  3)超聲波處理 頻率一般選在10KC至200KC,功率200-500瓦范圍,處理時(shí)間有數分鐘至數十分鐘不等,處理過(guò)程中注意冷卻。此法多用于微生物材料。 
  3.化學(xué)及生物化學(xué)法
  有自溶法,酶解法和表面活性劑法等。
  1)自溶法 在一定PH和適當的溫度下,利用組織細胞內自身的酶系統將細胞破碎的方法。此過(guò)程需較長(cháng)時(shí)間,常用少量防腐劑如甲苯、*等防止細胞的污染。
  2)酶溶法 利用各種水解酶,如溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶、半纖維素酶、脂酶等,將細胞壁分解,使細胞內含物釋放出來(lái)。有些細菌對溶菌酶不敏感,加入少量巰基試劑或8摩爾尿素處理后,使之轉為對溶菌酶敏感而溶解。
3)表面活性劑處理 如十二烷基硫酸鈉、*化十二烷基吡啶等。

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